細胞培養的核心之一是無(wú)菌操作,那么，菌從何而來(lái)?從人、物品以及環(huán)境中來(lái)。使用一次性、已滅菌的實(shí)驗工具，能有效降低污染引入的風(fēng)險，但總有一些工具、總有一些環(huán)節是需要反復使用的。而這就需要進(jìn)行清潔和滅菌。
Part1
選擇滅菌方法的基本原則 :
常見(jiàn)的2種操作是高壓滅菌和過(guò)濾除菌,主要講一下這兩者的區別和注意事項.
滅菌方法的選擇主要基于物品在高溫下的穩定性,可抗高溫的物品例如玻璃、金屬、耐熱塑料(PTFE)可采用干熱滅菌;
熱穩定的液體可以采用濕熱滅菌,也就是高壓蒸氣滅菌;熱敏感的塑材可以用乙醇或射線(xiàn)滅菌;熱不穩定的液體可以采用過(guò)濾除菌。
Part2
高壓滅菌
常見(jiàn)的高壓滅菌方法是，使用滅菌鍋加熱水提高溫度和壓力來(lái)完成，其實(shí)驗條件是將實(shí)驗工具所處的環(huán)境加熱至121°并維持至少20分鐘。
由于水蒸氣會(huì )滲透至整個(gè)空間，滅菌結束后需要有一個(gè)干燥的過(guò)程，高壓蒸汽滅菌適用于熱穩定的液體，例如水、鹽溶液、或一些成份對熱穩定的培養基；例如LB，同時(shí)，這種方法也適用于耐熱的塑料，不少離心管、移液器、吸頭、吸頭盒。都是可以通過(guò)高壓來(lái)滅菌的。
使用高壓滅菌需要注意2點(diǎn):1 將含有液體的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，如果其使用塑料蓋密封，應在滅菌前擰松蓋子，以防滅菌過(guò)程發(fā)生爆炸;2 如果實(shí)驗工具需要后續用于無(wú)菌操作實(shí)驗，建議滅菌鍋所用的水使用無(wú)菌的超純水，因為滅菌過(guò)后，鍋內有可能存在凝結水，而后者可能會(huì )存在污染帶入的風(fēng)險。
Part3過(guò)濾除菌
對于不耐熱的液體，可以使用孔徑為0.1-0.2um的微孔過(guò)濾器除菌，過(guò)濾的方法分為正壓過(guò)濾和負壓過(guò)濾，區別在于正壓過(guò)濾大多通過(guò)外力推壓針筒，使目標液體通過(guò)濾器的濾膜后，雜質(zhì)或污染物留在膜上，液體過(guò)濾至新的容器內。負壓過(guò)濾是通過(guò)將容器外接一個(gè)泵，利用泵把容器內的空氣抽走，實(shí)現一個(gè)負壓的狀態(tài)，而液體則從容器上方往下透過(guò)濾膜流入容器內。
